Comet-Assay: Fragen zu den mikroskopischen Bildern (Forschung)

H. Lamarr , München, Montag, 28.09.2009, 19:24 (vor 5557 Tagen) @ Alexander Lerchl

Die Zellen (jeweils insgesamt 1000 pro Proband) wurden visuell und subjektiv in die Kategorien A – E klassifiziert.

Halt, moment mal, nicht so schnell ...

Mit dem Bild unten aus der Publikation Diem/Rüdiger komme ich als popliger Laie noch nicht so ganz klar, genauer mit den mikroskopischen Bildern, die ja wohl das zeigen, was eine Laborantin während einer Comet-Assay-Klassifizierung beim Blick durchs Mikroskop zu sehen kriegt:

1) Ich bin echt guten Willens, aber einen Schweif nach Kategorie A könnte ich beim besten Willen von C nicht unterscheiden, dazu sind die beiden Abbilder viel zu ähnlich.

2) Was ist denn mit dem mikroskopischen Bild von E passiert, ich sehe nur Schwarz, dabei müsste dort doch der längste Kometenschweif zu sehen sein.

3) Wieso ist das Kometenbild bei Kategorie B größer als das von D, obwohl bei D viel mehr fragmetierte DNA ausschweift?

4) Wie geht das "subjektive" Klassifizieren in die Kategorien A - E denn nun genau? Gibt es dazu eine Art "Mustervorlage" von Komtetenschweifen (z.B. wie in dem Bild), die dann "irgendwie" als Schablone ins Mikroskopbild eingeblendet wird, damit die Laborantin ordentlich kategorisieren kann oder wie geht das?

5) In dem Artikel steht, dass die Proben für den Comet-Assay spätestens nach 3 Tagen ausgewertet sein müssen, weil danach die Proben anscheinend zerfallen. Heißt das nun, dass man das, was die Laborantin live beim Blick durchs Okular zählt, auf jeden Fall noch in Form von Fotos/Screenshots archiviert, so dass später eine Prüfung oder neue Auswertung möglich ist (kann ich mir vorstellen)? Oder wird nur kategorisiert indem Werte in Tabellen eingetragen werden, deren Zustandekommen dann aber wegen der zerfallenen Probe niemand mehr prüfen kann (kann ich mir nicht vorstellen)?

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Jedes komplexe Problem hat eine Lösung, die einfach, naheliegend, plausibel – und falsch ist.
– Frei nach Henry Louis Mencken (1880–1956) –