Comet-Assay (2) (Forschung)

Alexander Lerchl , Freitag, 25.09.2009, 12:49 (vor 5559 Tagen) @ Alexander Lerchl
bearbeitet von Alexander Lerchl, Freitag, 25.09.2009, 15:17

Der Wiener Comet-Assay und seine Besonderheiten

In der Erstpublikation wurden zwei Methoden beschrieben und verglichen, nämlich der neue Comet-Assay á la Wien (den Comet Assay als solchen gab es schon länger) und der Mikrokerntest. Beide Methoden haben unterschiedliche Endpunkte, darauf wird weiter unten noch eingegangen.

Beide Assays wurden an Lymphozyten (Untergruppe der weißen Blutkörperchen) aus Blutproben von insgesamt 80 Personen unterschiedlichen Alters (21 – 60 Jahre) durchgeführt, wovon 40 Frauen und 40 Männer waren. 28 waren Raucher, 52 Nichtraucher. Es fanden sich keine Unterschiede zwischen den Geschlechtern, aber eine höhere Zahl von Mikrokernen bzw. Strangbrüchen bei älteren Probanden. Es fanden sich keine Unterschiede zwischen Rauchern und Nichtrauchern. Die Werte waren bei Rauchern tendenziell sogar niedriger. Das ist deswegen bemerkenswert, weil frühere Untersuchungen von Rüdiger an Lymphozyten und Monozyten (ebenfalls eine Untergruppe der weißen Blutkörperchen) genau dies nachgewiesen haben:

„Die Arbeitsgruppe von Prof. Rüdiger fand bei 4 von 5 Rauchern aus der DNA-Addukt-Studie (Projekt 2/90) eine erhöhte 'Nick-Translation' in Lymphoczyten unmittelbar nach dem Rauchen. Die 'Nick-Translation' ist ein Maß für das Vorhandensein von DNA-Strangbrüchen.“
Quelle: http://legacy.library.ucsf.edu/tid/yjd00a99/pdf

Anmerkung: vermutlich ist hier oder im Nachfolgenden ein Druckfehler (Verwechslung von 2/90 mit 3/90), da das Projekt 3/90 von Prof. A. und Rüdiger dies beschrieb:

„Projekt 3/90
Thema : DNA-Addukte in Monocyten nach akuter Exposition mit Tabakrauch
Forscher: Prof. A. / Prof. Rüdiger
Kosten: DM 54.650,-- ausbezahlt: ca DM 100 .000,--
(mit Optionen : DM 210.450,--)
Beginn : Juni 1990
Ende : Dezember 1990
Ergebnis : Bei einigen Rauchern zusatzliche Spots nach dem Rauchen. Extreme ETS-Belastung hat keinen Einfluß auf DNA-Adduktrate.
Publikation : Poster beim Krebskongreß in Hamburg, August 1990"

Quelle: http://legacy.library.ucsf.edu/tid/bev59e00/pdf

(Das ist alles lange anerkannt. Eine neue Arbeit zu Rauchen und DNA-Schäden bei Müttern und Neugeborenen findet sich hier; dort auch viele Literaturstellen).

Abgesehen von diesem Schmankerl finden sich in der Publikation von Diem und Rüdiger eine Reihe von schwerwiegenden Unstimmigkeiten:

Erste Unstimmigkeit:

Die Mikrokerne wurden aus 2000 Zellen bestimmt (S. 438), wobei „Das Auftreten von mehreren Mikrokernen in einer doppelkernigen Zelle“ nur „als ein Ereignis gewertet“ wurde. Das Ergebnis (für jede Probe) wurde „in Mikrokernen/500 doppelkernige Zellen angegeben.“ Es ist daher logisch zwingend, dass die Ergebnisse jeder Probe, die in der Veröffentlichung auch alle angegeben wurden, nur Nachkommastellen von 0.00, 0.25, 0.50 und 0.75 enthalten dürften. Dies ist aber nicht der Fall. Als Nachkommastellen werden alle Ziffern von 0-9 angegeben. Auch durch Rundungsfehler kann dieser Befund nicht erklärt werden.

Zweite Unstimmigkeit:

Die 80 Werte für den Mikrokerntest und den Comet-Assay sind numerisch fast identisch (s. Abb. 2). Der Korrelationskoeffizient (r²) beträgt 0.9765, ein Wert, den man selbst bei genauest arbeitenden Mitarbeitern nicht erwarten kann, da jeder der beiden Parameter manuell / mikroskopisch bestimmt wurde und beide Tests unterschiedliche biologische Endpunkte haben. Besonders wichtig zu erwähnen ist, dass für den Comet-Assay eine manuelle, subjektive Einordnung in Klassen vorgenommen wurde (A-E), ohne dass irgendeine kontinuierliche Messgröße (z.B. Komentenlänge) in die Bewertungen einging. Für Interessierte noch die zusätzlichen Informationen: Steigung der Regressionsgeraden 0.954 ± 0.017; Schnittpunkt der Geraden mit der X-Achse bei Y=0: -0.1515 bis 0.2090; Schnittpunkt der Geraden mit der Y-Achse bei X = 0: -0.2061 bis 0.1397. Der Schnittpunkt der Regressionsgeraden mit den beiden Achsen ist vom Ursprung (0|0) demnach statistisch nicht verschieden.

(Fortsetzung folgt)

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"Ein Esoteriker kann in fünf Minuten mehr Unsinn behaupten, als ein Wissenschaftler in seinem ganzen Leben widerlegen kann." Vince Ebert

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Lymphozyten, Comet-Assay